产品内容： 
试剂一：液体×1 瓶，-20℃保存。用前 1 d 取出置于 4℃充分解冻后混匀。 
试剂二：粉剂×1 瓶。4℃保存。临用前加入 220 μL 试剂四，充分溶解。 
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 220 μL 试剂四，充分溶解。 
试剂四：液体 10ml×1 瓶，4℃保存。 
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 440μL 试剂四，充分溶解。
 
产品简介： 
FAS 是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶 A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍表达 于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。 测定原理： FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP+；NADPH 在 340nm 有 吸收峰，而 NADP+没有；通过测定 340nm 光吸收下降速率，计算 FAS 活性。 
试验中所需的仪器和试剂： 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。 
 
操作步骤： 
一、粗酶液提取： 
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为 1:5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。16000rpm，4℃离心 40min，取上清置于冰上待测。 
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500-1000:1 的比例（建议 500 万细 胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3 分钟）； 然后 12000g，4℃离心 40min，取上清置于冰上待测。 
二、FAS 测定操作： 
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。 
2. 试剂四置于 37℃水浴中预热 30 min 以上。 
3. 空白管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 蒸馏水、20μL 试剂二、20μL 试剂三、820μL 试 剂四和 40μL 试剂五，迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和 90s 时吸光值，分别记 录为 A1 和 A2。△A 空=A1-A2。 
4. 测定管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 上清液、20μL 试剂二、20μL 试剂三、820μL 试 剂四和 40μL 试剂五，迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和 90s 时吸光值，分别记 录为 A3 和 A4。△A 测=A3-A4。 
注意：空白管只需测定一次。 
 
三、FAS 活性计算： 
（1） 按照蛋白浓度计算 
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/mg prot) =[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106 ] ÷(Cpr×V 样)÷T =1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷Cpr 
（2） 按照样本质量计算 
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 
FAS(U/g) =[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106 ] ÷(W×V 样÷V 样总)÷T =1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷W 
（3） 按细胞数量计算 
活性单位定义：37℃中每 104 个细胞每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/104 cell ) =[(△A 测定管 –△A 空 白 管 )÷ε÷d×V 反 总 ×106 ] ÷( 细胞数量 ×V 样 ÷V 样 总)÷T=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷细胞数量 （4） 按液体体积计算 
活性单位定义：37℃中每 ml 样本每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1U。 FAS(U/g) =[(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106 ] ÷V 样÷T =1.61×(△A 测定管–△A 空白管) 
ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V 反总：反应体系总体 积，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，V 样：加入反应体系中上 清液体积，100μL=0.1 mL；T：反应时间，1min。 
 
注意事项： 
1、 上清液蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。 
2、 配置好的试剂 4℃保存，三天内使用完毕。

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