白藜芦醇含量检测试剂盒 高效液相色谱法

品牌：Solarbio | 货号：BC4454|规格:50T/48S

产品简介： 白藜芦醇是一种天然的二苯乙烯类多酚物质，又名芪三酚。天然的白藜芦醇具有反式和顺式两 种构型，存在于花生、葡萄、藜芦、虎杖、桑椹等植物中，其中以虎杖、花生、葡萄中的含量较为 丰富，主要以反式存在。白藜芦醇具有广泛的药理作用，可作为健康食品和新药开发特别是抗肿瘤 药物开发的原料。 白藜芦醇在 306 nm 下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。

试验中所需的仪器和试剂： 高效液相色谱仪（C18 柱（4.6×250 mm），紫外检测器（VWD））、台式离心机、超声波清洗 机、可调式移液枪、研钵/匀浆器、棕色 EP 管、针头式过滤器（50 个，有机系，0.45 µm），注射 器，抽滤器，滤膜（有机系、水系各一个），棕色进样瓶（50 个，2 mL）、甲醇（色谱纯，500 mL）、 超纯水。

产品内容： 提取液：液体 100mL ×1 瓶，4℃保存。 标准品：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前加入 1 mL 提取液配制成 1 mg/mL 白藜芦醇标准溶 液。每次使用完毕建议用封口膜封口防止挥发。

实验前准备工作：

1. 将 500 mL 甲醇和 500 mL 超纯水用滤膜抽滤，除去溶剂中杂质，以防堵塞色谱柱。（甲醇采用 0.45 µm 有机系滤膜抽滤，超纯水采用 0.22 µm 水系滤膜抽滤）。

2. 流动相的配制：A：抽滤完毕的 500 mL 超纯水一瓶。B：抽滤完毕的 500 mL 甲醇一瓶。将配制 好的流动相超声 30 min，除去溶剂中的气体，防止压力不稳，影响实验结果。

3. 标准品的配制：将 1 mg/mL 的白藜芦醇标准溶液用提取液分别稀释成 100 µg/mL、50 µg/mL、10 µg/mL、5 µg/mL、1 µg/mL 的白藜芦醇标准品溶液。

（配制的标准品浓度仅供参考，可根据实际样 品浓度进行调整）。采用针头式过滤器过滤后待测。每次使用完毕建议用封口膜封口防止挥发。

操作步骤：

一、粗品白藜芦醇的提取：

将样本在避光处放置干燥，再放入研钵中磨碎，称取 0.15 g 加入到棕色的 EP 管中，加入 1.5 mL 提取液，避光，常温过夜浸取。然后超声 2 h（50 Hz，40℃）。10000 rpm 离心 10 min（25℃）， 取上清液（若溶液中仍存在固体可再次离心）。将取得的上清液用针头式过滤器过滤到棕色进样瓶 内待测。

二、测定步骤：

1. 开启电脑、打开液相色谱仪各模块开关按钮，安装上色谱柱，打开软件，在方法组中设置进样量 为 10 µL，柱温：室温（约 25℃），流速为 1 mL/min，波长为 306 nm，梯度洗脱程序如下表，走样 时间 45 min，设置完毕保存方法组。

2. 用流动相清洗柱子，采用流动相初始浓度比例平衡柱子，待基线稳定后开始加样。

3. 加入标准品溶液 10 µL，在 20 min 内可分离白藜芦醇，白藜芦醇的保留时间为 13.6 min 左右（体 系、柱子等不同，保留时间有差异，仅作为参考）。计算不同浓度白藜芦醇标准品的峰面积。

4. 加入样品溶液 10 µL，在相应的保留时间处检测白藜芦醇的峰面积。

三、白藜芦醇含量计算

以标准品浓度（µg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制白藜芦醇的标准曲线，将样品的峰面 积代入标准曲线，计算提取液中白藜芦醇的浓度 x（µg/mL）。

样本中白藜芦醇的含量（µg/g）= x ×V 提取÷W=1.5x÷W V 提取：提取液的体积，1.5 mL；W：样本质量，g；单位换算系数，1 µg=10 -3 mg。

注意事项

1. 标准品的稀释倍数要根据样品中白藜芦醇的浓度确定，样品中白藜芦醇的峰面积必须在不同浓度 的白藜芦醇标准品的峰面积之内，该标准品的稀释倍数只是一个参考。

2. 使用完毕后，需要用高浓度的有机相冲洗色谱柱，再按柱子的种类规范冲洗，防止损伤色谱柱。

3. 白藜芦醇对光不稳定，完全避光条件下纯的反式白藜芦醇在乙醇溶液中也仅能稳定一周左右，因 此在进行白藜芦醇的含量分析时，建议标准品溶液和样品溶液随配随用。