TOPO SHOTGUN SUBCL ECOMPS

用于BAC 克隆的快速亚克隆
说明：
TOPO® 鸟枪法亚克隆试剂盒专门设计用于简单快速地鸟枪法亚克隆大片段DNA，例如细菌人工染色体(BAC) DNA，可生成一个用于测序的克隆
文库。该试剂盒提供了：
• 一种简单高效地剪切和平端化大片段DNA 的方法
• 一种独特的用于快速连接的经拓扑异构酶I 活化的新型载体
• 优化的克隆DNA 片段序列分析
The TOPO® 鸟枪法亚克隆试剂盒利用雾化器（图1）— 一个很小的用于雾化液
体的塑料装置— 压缩空气，在仅仅30 秒的时间内就可将大的DNA 片段剪切
成2-3 kb 的小片段。大片段DNA 经过剪切后，用T4 DNA 聚合酶和Klenow
酶将其平末端化，使之能够快速的连接到pCR®4Blunt-TOPO® 载体上。
pCR®4Blunt-TOPO® 载体（图2）共价连接到拓扑异构酶I，用于高效的TOPO® 克
隆(1)。pCR®4Blunt-TOPO® 载体含有一个最小化的多克隆位点，提高测序克隆
的效率。测序引物位点距离平末端的克隆位点只有33 个碱基，这样能够测到更
多的插入序列和较少的载体序列。pCR®4Blunt-TOPO® 的便利之处还包括：
• 多克隆位点处独特的Sse8387 I 酶切位点简化了测序前的嵌套缺失
• 选用了T7、T3、M13 (-20) 正向测序引物和M13 反向测序引物位点
• 可以利用卡那霉素和氨苄青霉素抗性基因在大肠杆菌中进行选择
• 用于选择阳性重组子的ccdB 基因(2)