产品描述

MSCgo™ Osteogenic间质干细胞成骨诱导分化培养基，不含血清，无异源，即用型完全培养基，诱导hMSC分化成成熟成骨细胞。适用于不同来源的MSC，如骨髓、成骨组织和脐带组织；hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT。

MSCgo Rapid Osteogenic XF 10天以内快速诱导成骨，而MSCgo™ Osteogenic需要14-21天。

成骨结果

钙结节、钙分泌与矿化形成，表明hMSC分化成骨。可以用茜素红S(ARS)染色检测。使用不同的hMSC（细胞类型、年龄、代数）形成钙结节与钙分泌的数量也不一样。

所需材料

• MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium  BI; 05-440-1

MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium  BI; 05-442-1

• MSC NutriStem® XF Medium: BI; 05-200-1 and 05-201-1

• MSC Attachment solution : BI; 05-752-1

• 可选： Alizarin Red S (ARS), Sigma; A-5533，建议选择Vivacell品牌，间充质干细胞成骨分化染色试剂盒，货号： C37C00150。

成骨诱导分化操作

1       接种hMSC：用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF，接种6x104 细胞 (3x104 cells/cm2)。

注意：若使用其他培养器皿，请适当调整体积。

2       置于37°C，5% CO2 培养箱中培养。

3       分化：培养24h后即细胞融合度达到80%时，将MSC NutriStem® XF 培养基吸除，每孔加入0.5ml分化培养基。

注意：若细胞融合度<80%，继续再培养一天。

4       置于37°C，5% CO2 培养箱中培养10-21天，每2-3天换液。

注意：培养时间越长，越容易矿化，ARS染色更明显。

5       成骨评价：使用2%的ARS染色液。

ARS 染色分析 （可选）

制备2% ARS染色液

注意：染色液需新鲜制备，或调节pH 4.1-4.3

l  将2g ARS (Sigma；A-5533) 溶解到100ml 蒸馏水中。

l  用0.1N HCl 或 0.5% v/v NH3调节pH 4.1-4.3。

l  混合均匀，用0.45 μm CA 注射器(如：Minisart 16555)过滤。

l  溶液置于2-8°C储存一年。

l  使用前测pH值，如有必要用0.1N HCl 或 0.5% v/v NH3调节pH 4.1-4.3。

ARS 染色过程

l  吸除培养基，用DPBS (BI; 02-023-1)洗一次（1ml/well）

l  固定：吸除DPBS，每孔加入1ml 70% ETOH。

l  室温固定30-60分钟。

l  吸除ETOH，用蒸馏水洗涤3次（1ml/well）。

l  吸除蒸馏水，每孔加入1ml 2% ARS 染色工作液。

l  室温静置30-60分钟。

l  吸除染色液，用1ml 蒸馏水洗涤4次（1ml/well）。

注意：细胞分泌的钙会洗脱掉，钙化结节会被染色。

l  每孔加入1ml 蒸馏水避免细胞干燥。

l  观察成骨染色效果、图像采集及进行成骨评价。

注意：成骨细胞含钙会被ARS染成橘红色。

半定量ARS 染色 （可选）

l  每孔用0.5ml 10% (w/v in DDW) CPC洗涤ARS染料。

l  室温下静置1小时。

l  550nm 测OD值（10% CPC作为空白对照）。(150μl/well; 96w/p)