产品信息

产品描述

本试剂盒主要通过将吖啶橙和EB结合染色的方式检测细胞凋亡情况，主要原理是：吖啶橙能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色荧光，溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。经AO和EB双染后，在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：①正常细胞（normal cells），核染色质被AO着均匀绿色并呈正常结构分布于细胞中央；②早期凋亡细胞（early apoptotic cells），核染色质被AO着绿色在细胞的一侧呈月牙状或颗粒状；③晚期凋亡细胞（late apoptotic cells），核染色质被EB染色为橘红色倾斜于细胞内部并呈固缩状或圆珠状；④坏死细胞（Necrotic cells），表现为细胞体积增大，核染色质被EB着色为橘红色，细胞轮廓模糊，细胞即将瓦解。

本产品AO、EB溶液浓度分别为100μg/ml，所含稳定剂不影响实验效果。

产品组分

运输和保存方法

冰袋运输；

4℃避光密封保存，一年有效。

注意事项

1）AO、EB均为诱变剂，可与DNA结合，操作时务必小心谨慎！

2）含酚红培养基对观察有轻微影响。建议使用无酚红培养基。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1 工作液制备：使用前先根据用量，将AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液，现用现配。

2 细胞染色

1）对于贴壁细胞或爬片：吸除培养基，用PBS清洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞，加入新的PBS；如果需要观察全部细胞特性，保留未贴壁细胞，可以直接在培养基中加入工作液。按照每毫升培养基或PBS中加入20μl工作液即可。室温放置2-5min后于荧光显微镜下观察。

2）对于悬浮细胞：可直接加入工作液或离心收集细胞后在PBS中加入工作液。按照每毫升培养基或PBS中加入20μl工作液即可。室温放置2-5min后于荧光显微镜下观察。

【注】：染色液工作浓度和染色时间可根据具体实验情况适当调整，以期达到最佳效果。

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