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逆转录病毒包装

作者:广州莱德尔生物科技有限公司 2013-09-26T16:07 (访问量:3098)

逆转录病毒(Retrovirus) 是一类已知的RNA 病毒。需在逆转录酶的作用下首先将RNA 转变为cDNA,再在DNA 复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增的一类病毒。该载体系统有两部分组成,一是带有外源基因的重组反转录病毒载体分子,二是能以反式提供病毒结构蛋白的包装细胞,其要求是能高效产生感染靶细胞的重组病毒颗粒,且无野生型的反转录病毒存在,后者是基因治疗安全性的关键问题。

服务优势:
1. 转染范围广,可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等;
2. 转入的外源基因可完全整合;
3.对细胞感染率高,达到100 %;
4.感染细胞不产生病变,可建立细胞系长期持续表达外源基因。
逆转录病毒载体的不足之处,如:
1.只能整合至分裂期细胞;
2.可插入外源基因片断小(<10kb),难以满足较大基因的插入;
3.病毒滴度是限制临床应用的主要方面;
4.有产生野生型病毒或辅助型病毒的可能,随机整合可能产生不良作用。

服务内容:

  1. 瞬时基因沉默;
  2. 稳定基因沉默。


服务流程:
1.含目的基因的逆转录病毒载体的构建和纯化提取;
2.逆转录病毒表达载体和辅助质粒共转染293T细胞;
3.大约在转染48 h后,收获逆转录病毒上清,轻轻地移出上清,用0.45μm的滤膜过滤,或在4℃以500g离心5min以除去活细胞;
4.如果在1~2 h内使用逆转录病毒上清,将其放置在冰上,若时间间隔较长时,置于干冰上冰冻,而后转到-70℃贮存;
5.融化冰冻的上清,在37℃下加温片刻,立即使用。

客户提供:
所要表达的外源基因名称或序列和所要选择的穿梭载体。

我们提供:
提供重组后的腺病毒载体质粒(4μg),并附上重组成功的酶切鉴定结果及对目的基因的PCR鉴定结果。

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