百奥赛图基于CRISPR/Cas9技术的EGE技术-分析方法-资讯-生物在线

百奥赛图基于CRISPR/Cas9技术的EGE技术

作者：北京百奥赛图基因生物技术有限公司 2018-05-18T00:00 (访问量:3626)

百奥赛图EGE^®基因编辑平台

CRISPR/ Cas9 （Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是近些年来兴起的，应用特别广泛的靶向基因特定DNA修饰的重要工具。

百奥赛图在CRISPR/Cas9技术基础上开发和优化出一套高效的基因敲除/敲入技术（ Biocytogen Extreme Genome Editing System，简称EGE^®技术）。

该技术比普通的CRISPR/Cas9技术介导的同源重组效率提高10-20倍，从而使得基因改造更加快速和方便。

Rosa26/ Hipp11 (H11)位点基因定点敲入/转基因小鼠

由于定点转基因的优势，ROSA26位点非常受欢迎，成为定点转基因最常用的位点。类似的用于定点转基因的其他“安全”位点也被发现并应用。由于研究需要，可能会有同时需要两个类似“安全”位点的情况，或者在ROSA26已被使用的情况下，需要使用其他“安全”位点。在更多研究需要时，多个能允许定点敲进的“安全”位点能提供更多的应用可能。除ROSA26外， Hipp11 (H11)是目前已见应用的类似位点中的一种较常用于定点转基因的“安全”位点。

参考文献：
[1]. Hippenmeyer S, Youn Y H, Moon H M, et al. Genetic Mosaic Dissection of Lis1 and Ndel1 in Neuronal Migration[J]. Neuron, 2010, 68(4): 695-709.
[2]. Tasic, Bosiljka, et al. "Site-specific integrase-mediated transgenesis in mice via pronuclear injection. " Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 108.19(2011):7902.
[3]. Liu C, Sage J C, Miller M R, et al. Mosaic analysis with double markers reveals tumor cell of origin in glioma[J]. Cell, 2011, 146(2): 209-221.

如图，利用EGE技术将pCAG-LoxP-3 X STOP-loxP-Tdtomato-WPRE-bGHpA插入至Rosa26位点的第一和第二外显子之间，获得了相应的cKI大鼠，与Crh-Cre大鼠交配的Crh-Cre/Tdtomato后代中，Tdtomato特异性在海马中高表达。

百奥赛图基因编辑平台严格的质控标准

利用Southern检测排除随机插入

对大量数据统计分析发现，采用ES细胞方式制备，随机插入概率约为20%；采用CRISPR/Cas9技术，随机插入概率约为32%。而这32%中有14%的随机插入无法依靠交配传代去除。排除随机插入的金标准是Southern blot检测。百奥赛图坚持进行Southern检测，以确保基因编辑获得的动物无随机插入。

百奥赛图大/小鼠的三重检测

百奥赛图EGE^®系统的双重保险

了解更多资源

EGE技术基因敲除/敲入鼠	http://www.bbctg.com.cn/second/30.html
ESC/HR技术基因敲除/敲入鼠	http://www.bbctg.com.cn/second/29.html
Tol2系统转基因技术服务	http://www.bbctg.com.cn/second/32.html
EGE技术基因敲入细胞系	http://www.bbctg.com.cn/second/141.html
HITI技术基因敲除细胞系	http://www.bbctg.com.cn/second/142.html

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